培养基的制作方法

1．配制母液（例MS母液的配制*）
配制流程见图1-1。其顺序是：
（1）用灵敏度为0.1mg的天平称取药品.
（2）往烧杯加入适量蒸馏水或无菌水.
（3）将药品放入烧杯内,并用玻璃棒搅拌使其溶解,难溶时可适当加温以加速溶解.
（4）要待一种药品完全溶解后再加入下一种药品.
（5）所加入的药品应依次加入，直至药品全部加入溶解为止。

*MS母液的配制
按MS培养基成分表，将各种化学物质归成几大类，分别为大量元素、微量元素、铁盐、有机物。

大量元素10倍液(mg/L)	微量元素1000倍液（mg/L）	有机物100倍液（mg/L）	铁盐
NH4NO3 1,6500 KNO3 1,9000 CaCl2?2H2O 4,400 MgSO4?7H2O 3,700 KH2PO4 1,700	HBO3 6,200 MnSO4?4H2O 22,300 ZnSO4?7H2O 8,600 KI 830 Na2MoO4?2H2O 250 CuSO4?5H2O 25 CoCl2?6H2O 25	甘氨酸 200 肌醇 10,000 烟酸 50 维生素B6 50 维生素B1 40	5.57g FeS04?7H2O和7．45g Na2一EDTA溶于1升蒸馏水里，用时每配1升MS培养基取5ml。
取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。	取烧杯注入约600ml蒸馏水,按顺序加入药品并使其溶解,最后加蒸馏水定容至1000ml。

2．培养基制备

配制流程见图1-2，其顺序是：
① 取烧杯或三角瓶注入一定量的蒸馏水，将各种母液按所需容积分别用移液管吸取并混合在一起，然后按要求加入一定量的激素、蔗糖后定容至一定体积。
② 用1mol/L的NaOH或HCl调节pH
③ 如制固体培养基，则加入1%左右的琼脂后加热煮沸，使其熔化。
④ 分装，可用漏斗将液状培养基注入培养瓶，注入量视培养瓶容量大小而定，通常为容器的1/5左右。
⑤ 封瓶口。
⑥ 高压蒸汽灭菌。120℃，1.5Mpa,消毒15～20min。注意压力不能太大，时间也不宜过长，否则蔗糖、有机物特别是维生素类物质会在高温下分解，影响培养基的酸碱度，琼脂也会分解，颜色变深且不易凝固。
⑦ 灭菌后的培养基可放入接种室内静置，让其降温后凝固，如需斜面可将其斜放。